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Tipo: Trabalho de Conclusão de Curso
Título: Clonagem e expressão da protease 3C do vírus deformador da asa (deformed wing virus – DWV)
Autor(es): Oliveira, Maria Carolina Paleari Varjão de
Primeiro Orientador: Cañedo, Andrés Delgado
1° Membro da banca: Boldo, Juliano Tomazzoni
2° Membro da banca: Torres, Fabiano Pimentel
Resumo: As abelhas são insetos da ordem Hymenoptera, e o representante mais conhecido é a abelha melífera (Apis mellifera L.), que é criada em grande escala para a produção de mel, cera, própolis, entre outros. Nos últimos anos a apicultura viu-se afetada por um aumento de eventos deletérios que culminam na perda das colméias, entre estes eventos encontram-se as infecções virais. O vírus com maior presença ao redor do mundo é o vírus deformador de asas (Deformed Wing Virus – DWV), um vírus pertencente à família Picornaviridae que infecta as abelhas tanto vertical quanto horizontalmente provocando morte nas fases iniciais de desenvolvimento ou deformação das asas e encurtamento abdominal, entre outras características físicas e comportamentais em indivíduos adultos. Os vírus da família Picornaviridae são pequenos vírus com genoma formado por RNA simples fita com sentido positivo e possuem uma única ORF no seu genoma que codifica uma poliproteína, a qual depois de traduzida é clivada pela protease 3C nela contida. Em outros vírus desta família, foi demonstrado que esta protease participa na regulação das funções das células hospedeiras através da degradação proteolítica de proteínas do hospedeiro, evitando e/ou bloqueando os mecanismos antivirais. Este trabalho teve por objetivo, realizar a clonagem molecular da sequência que codifica a protease 3C do vírus DWV. A partir de amostras de cDNA positivas para o vírus DWV, utilizando primers específicos juntamente com a técnica da reação em cadeia da polimerase (PCR), amplificou-se a região do genoma viral que codifica a protease 3C. A esta região foi adicionado um fragmento contendo 6 histidinas para posterior purificação proteica. O fragmento amplificado foi clonado no plasmídeo pGEX4T-1 pela técnica de PCR circular. A produção da protease 3C recombinante tem um peso molecular de aproximadamente 10 kDa e foi induzida em Escherichia coli da linhagem BL21(DE3)pLysS, por aproximadamente 6 horas realizando testes da indução a cada 2 horas de indução. Os resultados obtidos foram analisados por SDS-PAGE.
Abstract: Bees are insects of the Hymenoptera order, and the best known representative is the Apis mellifera L., repred on a large scale for the production of honey, bee wax and propolis. In the last years apiculture have been affected by an increase of deleterious events that culminate in loss of bee hives, among these events are the viral infections. The most abundant virus around the world the deformed wing virus (Deformed Wing Virus - DWV), a virus belonging to Picornaviridae family that infects the bees both vertically and horizontally causing death in the early stages of development or deformation of the wings and abdominal shortening among other behavioral and physical characteristics in adults. The Picornaviridae family of viruses are small viruses with genome constituted of simple strand RNA with positive sense and have a single ORF in its genome which encodes a polyprotein, which after translated, is cleaved by the 3C protease contained therein. In other viruses of this family, it was demonstrated that this protease participated in the regulation of functions of the host cells via proteolytic degradation of host proteins, preventing and / or antiviral blocking mechanisms. This study aims, perform the molecular cloning of the sequence were used as tamplote for PCR encoding the 3C protease from DWV virus. Positive DNA samples of DWV virus using specific primers to amplify the region of the viral genome which encodes the 3C protease. It is was added in a fragment of 6 his-tagg for subsequent protein purification. The amplified fragment was cloned into pGEX4T-1 plasmid by circular PCR. The production of recombinant 3C protease has a molecular weight of approximately 10 kDa was induced in E. coli strain BL21 (DE3) pLysS, for about 6 hours of induction conducting tests every 2 hours induction. The results were analyzed by SDS-PAGE.
Palavras-chave: DWV
Protease 3C
Apis mellifera
pGEX4T-1
Clonagem
Cloning
3C Protease
CNPq: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS
Idioma: por
País: Brasil
Editor: Universidade Federal do Pampa
Sigla da Instituição: UNIPAMPA
Campus: Campus São Gabriel
Citação: OLIVEIRA, Maria Carolina Paleari Varjão de. Clonagem e expressão da protease 3C do vírus deformador da asa (deformed wing virus – DWV). 2015. 31 f. Trabalho de conclusão de Curso ( Curso de Biotecnologia). Universidade Federal do Pampa. Campus São Gabriel. São Gabriel. 2015.
Tipo de Acesso: Acesso Aberto
URI: http://dspace.unipampa.edu.br:8080/jspui/handle/riu/4394
Data do documento: 2-Dez-2015
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