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Tipo: Trabalho de Conclusão de Curso
Título : Obtenção de marcadores fluorescentes a partir de fontes alternativas
Autor(es): Padilha, Mateus Filipe
Primeiro Orientador: Delgado Cañedo, Andrés
1° Membro da banca: Appelt, Helmoz Roseniaim
2° Membro da banca: Silva, Dennis Guilherme Costa
Resumo: Os corantes fluorescentes possuem uma ampla aplicação em análises biológicas, principalmente por serem capazes de marcar componentes celulares, permitindo a sua visualização. Canetas de uso comum podem possuir substâncias fluorescentes, mas também uma variedade de outros compostos, como lubrificantes, antioxidantes e surfactantes. A purificação permite que substâncias desconhecidas possam ser testadas em análises biológicas com menor influência de impurezas. Assim, novos marcadores fluorescentes podem ser encontrados a partir de fontes alternativas, como canetas, briófitas, algas e raízes vegetais. Nesse sentido, o presente trabalho teve como objetivo a purificação dos compostos fluorescentes presentes na caneta vermelha Pilot BP-1 INOX 1.0 (Brasil), de modo que possam ser utilizados em experimentos com amostras biológicas. Para isso, foi utilizada uma solução de 10% de tinta da caneta Pilot em etanol. A purificação foi realizada com cromatografia em coluna, com gradientes de polaridade com a fase móvel de hexano, acetato de etila e etanol. Com isso, foi possível visualizar a separação de dois principais compostos fluorescentes no interior da coluna. As frações provenientes da purificação foram analisadas por CCD, evaporadas e unificadas. Para se analisar o perfil cromatográfico dos compostos purificados, foi realizado um CLAE em solução isocrática de metanol e água (65:35) com fluxo de 1,1 ml/min a 35ºC). A análise indicou que houve diferença entre as substâncias obtidas com a purificação e o extrato não purificado. As rodaminas B e 123 foram usadas como controle, porém não foi possível detectar essas substâncias nos extratos da caneta e nos compostos purificados. Além disso, foi realizada a determinação das características óticas desses compostos em espectrofluorímetro. As análises mostraram que houve diferença no comportamento ótico entre as substâncias purificadas e as rodaminas. Além disso, os picos de emissão e absorção dos compostos purificados foram próximos aos valores da rodamina 6G encontrados na literatura. As substâncias fluorescentes obtidas também mostraram ter carga positiva a partir de análise por eletroforese, o que pode apresentar potencial de interação com biomoléculas negativas, como células, proteínas e ácidos nucleicos.
Resumen : Fluorescent stains have a broad application in biological analysis, mainly by labelling cellular components, allowing their visualization. Some pen inks can have fluorescent substances and a variety of other compounds, such as lubricants, antioxidants and surfactants. Purification allows unknown substances to be tested at biological analysis with less influence of impurities. Thereby, new fluorescent markers can be found from alternative sources, like pens, bryophytes, seaweeds and vegetable roots. Likewise, this present work aims to purify fluorescent compounds present at the red pen Pilot BP-1 INOX 1.0 (Brazil), in order to apply it/them in experiments using biological samples. Hereby, it was used a solution of 10% of Pilot pen ink at ethanol. The purification was done with column chromatography, using polarity gradients of the mobile phase of hexane, ethyl acetate and ethanol. Thereby, it was possible to visualize the separation of two main fluorescent compounds inside the column. The purified fractions were analyzed by TLC, evaporated and joined with each other. To identify the chromatographic profile, the compounds were injected in CLAE, using as mobile phase an isocratic solution of methanol and water (65:35) with flow rate of 1,1 ml/min at 35ºC. This experiment revealed that the purified compounds was different of the crude extract. The rhodamines B and 123 was used as controls, however the CLAE analysis did not detect them in the pen extract or in the purified substances. Furthermore, it was made the determination of optical characteristics of this compounds in a spectrofluorometer. The analysis showed that there were differences in the optical behavior between purified substances and the rhodamines used as control. The emission and absorption peaks of the purified fluorophores was close to the values of rhodamine 6G found in literature. The obtained fluorescent substances also showed positive charge by electrophorese analysis, what can be potentially used for interaction with negatively charged biomolecules, like cells and nucleic acids.
Palabras clave : Corantes Fluorescentes
Fluoróforo
Purificação Cromatográfica
Marcadores fluorescentes
Fluorescent stains
Fluorophore
Chromatographic purification
Fluorescent markers
CNPQ: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS
Idioma: por
metadata.dc.publisher.country: Brasil
Editorial : Universidade Federal do Pampa
Sigla da Instituição: UNIPAMPA
Campus: Campus São Gabriel
Citación : PADILHA, Mateus Filipe. Obtenção de marcadores fluorescentes a partir de fontes alternativas. 2017. 44 f. Monografia (Curso de Biotecnologia). Universidade Federal do Pampa. São Gabriel. 2017.
Tipo de acesso: Acesso Aberto
URI : http://dspace.unipampa.edu.br:8080/jspui/handle/riu/3875
Fecha de publicación : 14-nov-2017
Aparece en las colecciones: Biotecnologia

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